Comment faire pousser des bactéries dans une boîte de Pétri à la maison ?

Partie 1 Préparation des boîtes de Pétri

1. Préparer un milieu de culture gélosé.

   La gélose est une substance gélatineuse utilisée pour faire pousser des cultures de bactéries. La gélose est fabriquée à partir d'algues rouges et brunes, c'est un environnement idéal pour de nombreux types de micro-organismes. Parfois, d'autres substances, telles que du sang de mouton, sont ajoutées à la gélose, si l'objectif est d'obtenir une croissance plus rapide des micro-organismes.

   • Le moyen le plus simple est d'utiliser de la gélose en poudre. Vous aurez besoin de 1,2 grammes (½ cuillère à café) pour chaque boîte de Pétri de 10 cm.
   • Dans un récipient résistant à la chaleur, diluer la poudre d'agar avec 60 ml (¼ tasse) d'eau chaude. Vous comprenez que 60 ml, c'est pour une boîte de Pétri. Calculez vous-même la proportion dont vous avez besoin.
   • Placez le récipient d'eau et de poudre dans le micro-ondes et, en portant l'eau à ébullition, faites-la bouillir pendant une minute. L'essentiel est que la solution d'agar ne "s'enfuie".
   • Le milieu nutritif est considéré comme prêt lorsque la poudre est complètement dissoute et que le liquide lui-même est transparent.
   • Laissez le milieu de culture refroidir, puis passez aux étapes suivantes.
2. Préparez des boîtes de Pétri.

   Vous les avez vus - de petites tasses plates en verre ou en plastique transparent. Les boîtes de Pétri ont deux parties, une supérieure et une inférieure, elles sont insérées l'une dans l'autre, ce qui sert à protéger la culture de micro-organismes de l'air et d'autres sources potentielles de contamination, ainsi qu'à contenir les gaz libérés par les micro-organismes pendant la croissance phase.

   • Les boîtes de Pétri doivent être stériles. Stérile! Sinon, les résultats d'une expérience de culture de bactéries seront perdus. Si vous achetez des boîtes de Pétri, elles doivent être vendues dans un emballage hermétiquement fermé (ces boîtes sont pré-stérilisées à froid).
   • Retirez les gobelets de l'emballage et séparez les moitiés. Très soigneusement, versez le milieu de culture dans la moitié inférieure de la tasse avec une fine couche recouvrant juste le fond.
   • Fermez la boîte de Pétri rapidement pour empêcher les bactéries en suspension dans l'air de pénétrer dans la gélose. Laissez les boîtes de Pétri reposer tranquillement pendant 30 à 120 minutes, jusqu'à ce que le milieu de culture refroidisse et durcisse (le milieu de culture préparé ressemblera à de la gelée).
3. Réfrigérer les boîtes de Pétri.

   Si vous ne prévoyez pas de coloniser immédiatement les bactéries dans leur nouvelle maison, les boîtes de Pétri doivent être placées au réfrigérateur jusqu'à ce que leur heure vienne.

   • Conserver les boîtes de Pétri au réfrigérateur est une garantie que l'eau ne s'évapore pas (et les bactéries aiment beaucoup l'eau). De plus, le milieu de culture au froid deviendra encore un peu plus dur, ce qui vous évitera de le déchirer accidentellement lors de l'inoculation des bactéries.
   • Conservez les boîtes de Pétri au réfrigérateur à l'envers. Ainsi, la condensation ne s'accumulera pas sur le couvercle, qui s'égouttera alors et gâchera le milieu nutritif.
   • Les boîtes de Pétri contenant un milieu nutritif peuvent être conservées au réfrigérateur pendant quelques mois. Quand c'est leur tour, sortez les tasses du réfrigérateur et laissez-les revenir à température ambiante.

Partie 2 Bactéries en croissance

1. Ajouter la culture bactérienne dans une boîte de Pétri.

   La gélose est solide, la boîte de Pétri est à température ambiante - tout est prêt pour continuer l'expérience ! Quelle est la prochaine selon le plan? C'est vrai, replanter une culture de bactéries dans un milieu nutritif ! Et ici, il existe deux méthodes - soit le contact direct, soit l'échantillonnage.

   • Contact direct: dans ce cas, les bactéries pénètrent dans la gélose par ... oui, par contact direct avec elle.L'une des méthodes les plus courantes de replantation de cette manière consiste simplement à toucher légèrement la surface du milieu de culture avec votre doigt (cela n'a pas d'importance avant ou après s'être lavé les mains). Alternativement, vous pouvez toucher avec votre ongle ou même une vieille pièce de monnaie. Vous pouvez simplement placer un cheveu sur le milieu nutritif ou y déposer une goutte de lait. En général, utilisez votre imagination!
   • Échantillonnage: Cette méthode permet de prélever des échantillons de micro-organismes sur n'importe quelle surface et de les transférer dans le milieu de culture. Tout ce dont vous avez besoin, ce sont des cotons-tiges. Il suffit de glisser le stick là où vous souhaitez prélever un échantillon de microflore (même de la bouche, même du clavier), puis de faire glisser la même extrémité du stick le long de la surface du milieu de culture (ne pas le déchirer). Dans quelques jours, vous verrez des résultats intéressants et terribles de votre expérience !
   • Alternativement, des micro-organismes de différentes sources peuvent être ajoutés à la boîte de Pétri - pour cela, il vous suffit de diviser la boîte en quatre.
2. Fermez, signez et scellez les boîtes de Pétri.

   Après avoir placé les bactéries sur le milieu de culture, vous devez fermer le gobelet avec un couvercle et le sceller avec une sorte de scotch.

   • Assurez-vous de signer de quoi et d'où il pousse dans chaque tasse en particulier, sinon vous ne vous en souviendrez pas plus tard. Vous pouvez écrire avec un marqueur.
   • Par mesure de précaution supplémentaire, vous pouvez ranger chaque tasse dans un sac zippé séparé. Cela fournira une couche supplémentaire de protection pour les bactéries en croissance. Si le sac est transparent, cela ne vous empêchera pas de regarder les résultats.
3. Placez les boîtes de Pétri dans un endroit chaud et sombre.

   Disons quelques jours pour que les bactéries puissent se développer tranquillement. Et n'oubliez pas que vous devez maintenant stocker les boîtes de Pétri à l'envers, afin que les gouttes aléatoires de condensat tombant du couvercle ne gâchent pas la beauté de la colonie de micro-organismes.

   • La température optimale à ce stade se situe entre 20 et 37 degrés Celsius. Cependant, s'il est nécessaire que les micro-organismes se développent plus lentement, ils peuvent toujours être réarrangés dans un endroit plus frais.
   • Laissez les bactéries se développer pendant au moins 4 à 6 jours. Pendant ce temps, la culture se développera assez bien. L'odeur caractéristique provenant des boîtes de Pétri vous avertira que la croissance a commencé.
4. Enregistrez vos résultats.

   Au bout de quelques jours, vous remarquerez que dans chaque boîte de Pétri, quelque chose qui lui est propre est épais - bactéries, moisissures, champignons, etc.

   • Notez vos observations de chaque tasse, tirez des conclusions sur l'endroit où se trouvaient le plus de bactéries.
   • Qu'est-ce qu'il y a dans ta bouche ? Et sur la poignée de porte ? Et au clavier ? Oh, les résultats vont vous étonner...
   • À l'aide d'un marqueur spécial, vous pouvez suivre le taux de croissance des bactéries en dessinant chaque jour les contours de la culture au fond de la boîte de Pétri. Dans quelques jours, le fond ressemblera à une coupe d'arbre - tout tourne en rond !
5. Vérifiez l'efficacité des agents antibactériens.

   Il sera intéressant de voir ce qui se passe si vous ajoutez quelque chose d'antibactérien à la culture de bactéries (savon, par exemple). Quelle sera son efficacité ?

   • Placez une goutte de quelque chose d'antibactérien au centre avec un coton-tige, puis continuez l'expérience comme d'habitude.
   • Les bactéries dans le plat se développeront, formant un anneau autour de l'endroit où l'agent antibactérien a été appliqué. Il n'y aura pas de bactéries, c'est ce qu'on appelle. "zone morte".
   • L'efficacité des agents antibactériens peut être comparée en évaluant la largeur de la zone morte dans différentes boîtes de Pétri. Le principe est simple : plus la zone est large, plus la substance est efficace.

Partie 3 Élimination sûre des micro-organismes

1. Observez toutes les précautions.

   Avant l'élimination, vous devez prendre soin de la sécurité.

   • Oui, la plupart de vos bactéries ne constitueront pas une menace. Cependant, les grandes colonies de bactéries peuvent représenter une certaine menace, alors commencez par les tuer avec du chlore.
   • Lorsque vous travaillez avec de l'eau de Javel, protégez vos mains avec des gants en caoutchouc, vos yeux avec des lunettes et vos vêtements avec un tablier.
2. Versez l'eau de Javel dans les boîtes de Pétri.

   Avec la tasse ouverte, versez doucement une petite quantité d'eau de Javel. Tenez le bol à ce moment au-dessus de l'évier. Le contact avec l'eau de Javel tuera les bactéries.

   • Ne renversez pas d'eau de Javel sur votre peau, ça pique.
   • Mettez les boîtes de Pétri désinfectées dans des sacs zippés et jetez-les toutes à la poubelle.

Conseils

• La gélose aux pommes de terre peut également être utilisée : cela nécessite 20 grammes de pommes de terre, 4 grammes d'agar et 2 grammes de dextrose (glucose). Faites bouillir le tout dans une tasse à mesurer. Versez ensuite le liquide dans une boîte de Pétri et laissez sécher. Ensuite, prenez des cotons-tiges stériles et frottez-les là où il y a des bactéries, puis placez les bactéries dans le milieu de culture et couvrez la boîte de Pétri. Mettez-le dans un endroit chaud pour la journée. Le lendemain, vous devriez déjà voir une colonie de micro-organismes.

Avertissements

• Ne cultivez jamais de micro-organismes dangereux. Fluides physiologiques c'est interdit placer sur une boîte de Pétri. Si ces tasses sont ouvertes, cela peut entraîner une maladie grave.

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Le processus de croissance des cultures cellulaires telles que les bactéries impose des exigences particulières au milieu nutritif. Il n'y a pas de difficultés particulières à cultiver des bactéries, cet événement est assez facile à réaliser chez soi avec les connaissances appropriées du domaine de la microbiologie et un ensemble d'outils (le principal inventaire utilisé au laboratoire est une boîte de Pétri).

Le milieu est une solution spécialement formulée. Il s'agit d'un ensemble de composants qui offrent des conditions favorables à la culture de micro-organismes ou à l'accumulation progressive de leurs déchets, qui seront ensuite utilisés à des fins spécifiques. Ils sont largement utilisés dans l'industrie alimentaire et domestique. Pour chaque type de culture, l'environnement doit être différent. Ainsi, le processus de culture de bâtonnets d'acide lactique ou de bactéries pour une fosse septique est très différent.

Caractéristiques de la solution

Les milieux nutritifs sont classés selon la composition, le but, la consistance. Il existe deux groupes principaux : la production et le diagnostic.

1. Les environnements de production sont à la base de la fabrication de médicaments, de bactéries pour fosses septiques. Les solutions permettent le contrôle de la qualité des substances biologiques. Dans de tels milieux nutritifs pour les cultures de bactéries en croissance, il ne devrait pas y avoir d'impuretés toxiques nocives pouvant nuire aux humains ou affecter les processus vitaux des colonies.
2. Dans les milieux nutritifs de diagnostic, les sous-groupes cibles suivants sont distingués :

• pour l'isolement de certains types de cultures bactériennes (différentielles) ;
• pour cultiver une large gamme de colonies de micro-organismes;
• pour isoler un type spécifique d'agent pathogène; supports de stockage (enrichissement des bactéries avec leurs déchets).

La consistance se distingue :

• dense,
• liquide,
• semi liquide.

Dans les milieux nutritifs solides et semi-liquides, le composant principal est une base liquide, à laquelle de la gélose est ajoutée. C'est un polysaccharide qui est isolé en laboratoire à partir de certaines espèces d'algues.

La culture des colonies en culture dans un milieu avec ajout de gélose peut se faire à domicile ou en laboratoire, veillez à respecter la température ambiante. Cela est dû au fait que les milieux gélatineux fondent déjà à une température de + 25-30 ° C. Sous forme semi-liquide, ils sont placés à la surface d'une boîte de Pétri jusqu'à ce qu'ils soient complètement solidifiés.

Les milieux solides les plus courants : sérum sanguin coagulé, œufs, colonies peuvent également être cultivés sur pommes de terre.

Inventaire populaire et abordable

La culture de micro-organismes dans une boîte de Pétri est l'une des méthodes les plus courantes pour obtenir les bactéries nécessaires et elle est facile à utiliser. Il convient également aux cultures d'acide lactique.

Une boîte de Pétri est un récipient pour le laboratoire et à la maison, qui est constitué de deux boîtes plates avec des bords bas verticaux. Le plus grand plat sert de couvercle.

Afin de faire pousser des colonies dans un milieu nutritif, Petri doit être préparé en conséquence.Pour la stérilisation, de la chaleur sèche est appliquée à un récipient en verre à l'aide d'un four. Puis le milieu refroidi à 55°C (fondu) est soigneusement versé sur sa surface, en gardant les plats à l'horizontale. Vous pouvez utiliser n'importe quel coup de pinceau - des crevasses du sol ou des plinthes, de la table de la cuisine, même de votre propre peau. Secouez doucement le coton-tige avec des sujets de test invisibles sur la tasse et fermez le couvercle. Posez la tasse et observez les changements quotidiennement.

Il est important de savoir que les milieux nutritifs solides peuvent être utilisés dans une boîte de Pétri. Cela permet, en plus de la culture, d'effectuer un tamisage, un isolement de colonies isolées, d'évaluer la sensibilité des bactéries aux médicaments du spectre antibactérien.

Pour compter le nombre de colonies de culture à domicile ou en laboratoire, il suffit de porter la boîte de Pétri à une source lumineuse vive. La disponibilité et la facilité d'utilisation de cet inventaire simplifient grandement le processus de croissance des colonies bactériennes.

Souches pour l'industrie agroalimentaire

Pour que la production de produits alimentaires à base de lait soit à un niveau élevé, fournissant aux consommateurs les volumes nécessaires de yaourts, de kéfir et d'autres produits à base d'acide lactique, les technologues isolent les bactéries, les sélectionnent et fabriquent des ferments lactiques.

Les souches de culture d'acide lactique sont obtenues en laboratoire à partir de lactosérum avec l'ajout de :

• extrait de maïs,
• stimulants de croissance,
• sels tampons.

La culture de micro-organismes d'acide lactique, subdivisés en deux groupes - bâtonnets et streptocoques - nécessite une exposition à des limites de temps et de température.

Culture de micro-organismes pour le traitement des eaux usées

Pour atteindre une efficacité maximale dans la filtration des eaux usées, certains types de cultures bactériennes sont utilisés. Pour les propriétaires d'une fosse septique, c'est une substance irremplaçable qui empêche la propagation des odeurs désagréables, active le mécanisme de traitement des dépôts organiques au fond.

Les souches de fosse septique sont un mélange d'enzymes, de cultures vivantes et d'acides aminés. Le support utilisé est un support minéral spécial. Ce type de bactéries pour une fosse septique de chalet d'été est sujette à une animation suspendue, c'est-à-dire que jusqu'à ce qu'elle atteigne le fond de la fosse, les micro-organismes sont dans un état "dormant" et ne sont activés que par contact direct avec de l'eau ou des matières organiques. S'il n'y a pas assez de liquide dans la fosse septique ou si des températures basses règnent constamment, quelle que soit la méthode de culture, les bactéries "travailleront" plus lentement.

La culture de divers types de bactéries (acide lactique, pour les médicaments, pour une fosse septique) est réalisée par des spécialistes. Les médicaments sont livrés prêts à l'emploi au consommateur. Cependant, connaissant les règles de culture des souches, un milieu nutritif nécessaire pour chaque classe de cultures et ayant une boîte de Pétri à portée de main (pour les bactéries lactiques également), vous pouvez essayer de le faire chez vous. Les chances d'obtenir un bon résultat sont élevées, l'essentiel est de stériliser correctement la vaisselle, ainsi que d'exclure la pénétration de substances étrangères pouvant affecter la pureté de l'expérience. Cultiver des bactéries pour une fosse septique est plus difficile que d'obtenir un démarreur de culture d'acide lactique.

La seule chose que vous pouvez certainement faire pousser à la maison est la moisissure. Oui, oui, ce sont de petits champignons qui appartiennent à des micro-organismes.

Comment faire pousser des espèces ? Vous avez besoin d'un autoclave pour stériliser, de milieux nutritifs pour la croissance, d'un thermostat pour maintenir une température constante de 37 degrés, de beaucoup de nettoyage, d'eau de javel et de lampes UV.

Supposons que nous ayons tout. Nous prenons une boîte de Pétri et, disons, un milieu sélectif - gélose jaune-sel, seul Staphylococcus aureus pousse dessus (tout est stérile). Ensuite, vous devez ajouter des micro-organismes dans la tasse. Staphylococcus aureus aime vivre sur la peau, et ce n'est pas grave, alors touchez légèrement le support sans l'endommager. Ensuite, nous avons mis le thermostat pendant une journée.

Nous avons donc développé des colonies de staphylocoques. Mais les staphylocoques ne sont qu'un genre. Le plus souvent, plusieurs espèces poussent sur la coupe. Nous allons les définir. Tout d'abord, notez la présence de lécithinase sur la plaque.

Ces « nuages ​​» autour des colonies sont appelés lécithinases.

Voici les colonies sans lécithinase :

Ensuite, vous avez besoin de tubes à essai avec du mannitol, du plasma de lapin et de l'uréase. Tout est stérile. Nous apportons les colonies dans ces tubes et les mettons dans un thermostat. Avec une réaction positive, l'état de la substance dans les tubes à essai change. Le mannitol change de couleur (ne demandez pas à qui - cela varie selon le fabricant), le plasma liquide devient solide, l'uerase est généralement utilisée sur des disques de papier.

Ah oui, encore faut-il connaître au moins approximativement la technique d'inoculation, avoir une plaque de laboratoire, un brûleur, de l'alcool à 95% pour cela, une anse bactériologique. Et la capacité de travailler dans des conditions aseptiques !

Ceci est un guide approximatif. Et de cette façon, vous ne déterminerez que l'ESPÈCE, mais pas la souche. Cela n'a aucun sens de stocker tout le temps sur le même support, car les bactéries ont aussi faim et devront être repiquées sur une nouvelle gélose. Et conservé dans un thermostat, bien sûr.

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